55问答网
所有问题
当前搜索:
rt pcr引物设计原则
分子诊断和基因治疗应用前景
答:
包括三个基本步骤:双链DNA模板加热变性成单链(变性);在低温下引物与单链DNA互补配对(退火);在适宜温度下TapDNA聚合酶催化引物沿着模板DNA延伸。 (2)
PCR引物
:PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性,
引物设计
决定PCR反应的成败。由于致病基因是在正常基因序列中发生点突变、片段插人和(或)缺失,基因两翼...
为什么
PCR引物
可以决定被合成片段的大小
答:
因为GC之间有三个氢键,而AT之间只有两个氢键,因此GC含量越高,要打开氢键的能量就要求越大,即退火温度越高。 PCR退火有的是根据GC含量估算Tm 更详细说明次料:
PCR引物
应该保持合理的GC含量。含有50%的G+C的20个碱基的寡核苷酸链的Tm值大概在56~62℃范围内,这可为有效退火提供足够热度。一对...
PCR引物
必须与目的基因片段的一小段序列互补吗
答:
是的~而且3‘端必须严格互补~
有谁做过通用荧光
引物
多重
PCR
吗?做过的可以指点一下,谢谢咯!
答:
普通的SYBR green 法不能做这种实验,只有Taqman 探针才可以,ABI的仪器有5通道的,理论上可以做四个荧光同时检测,但是实际上不赞成这么做,一般同时做两个没问题,但是你的探针要
设计
好才行,也可以直接买ABI的成熟产品
求帮助!做
pcr
只有二聚体没有目的条带是什么原因?
答:
非别把酶加进去也行。最简便的办法是,在冰上把溶液全部配好,等到
PCR
仪的温度上升到65度以上,再把管子放进去,也算是热启动了。其实,如果序列没有什么特别的,只有引物二聚体的话,通常要么是模板,要么是
引物设计
出问题了。因为体系中没有匹配的序列供引物去识别和结合,只能形成二聚体了。
为什么
PCR
要将
引物设计
在不同的外显子上?
答:
貌似,为了区别DNA的污染。DNA上有外显子之间有内含子相隔,但是mRNA上是没有滴
两段相似的目的基因混合进行
pcr
技术扩增,该怎样进行
引物设计
?
答:
混合?是要将它们进行重叠连接吗?两段相似的目的基因首先比对下氨基酸序列是否相同,若是相同,就说明功能一样,直接增加拷贝就行。若是不一样,想要进行连接,一种是找不同的地方
设计引物
,另外一种直接送公司合成整段序列。最笨的方法就是连接之后,筛很多克隆,测序,可能有连接对的,几率比较低而已...
pcr
技术中哪些因素会引起非靶序列的产生
答:
Mg2+离子浓度对
PCR
扩增效率影响很大,浓度过高可降低PCR扩增的特异性,浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行PCR扩增时,扩增出的PCR产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新
设计引物
。
pcr
技术怎么理解?
答:
PCR
的每个循环过程包括高温变性、低温退火、中温延伸三个不同的事件:(①变性:加热使模板DNA在高温下(94℃左右)双链间的氢键断裂而形成两条单链;②退火;使溶液温度降至50~60℃,模板DNA与
引物
按碱基配对
原则
互补结合。3、延伸:溶液反应温度升至72℃,耐热DNA聚合酶以单链DNA为模板,在引物的...
求列表比较
PCR
技术与DNA生物复制的异同!
答:
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对
原则
复制成同样的两分子挎贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入
设计引物
,...
棣栭〉
<涓婁竴椤
5
6
7
8
10
11
12
9
13
14
涓嬩竴椤
灏鹃〉
其他人还搜